Провеждане на анализ
Реагентите трябва да се загреят до температура на измерване (37°C) преди анализ.
Добавете към кюветата
Смесете съдържанието на епруветката и включете хронометъра. Измерете оптичната плътност на пробата спрямо дестилирана вода на дължина от 340 nm точно след 1 минута. Повторете измерването 3 пъти с интервал от 1 минута. Изчислете промяната в абсорбцията за минута и след това изчислете средното измерване на абсорбцията за минута (o.p./min).
Изчисляването на коефициента на активност на AST се извършва по формулата:
където o.p./min е средната промяна в оптичната плътност за минута;
1.1 е общият обем на разтвора в кюветата, ml;
1000 - коефициент на преобразуване ml към l;
6.22 - коефициент на милимоларна абсорбция на NADH;
0,1 - серумен обем в ml;
1.0 е дължината на оптичния път.
При извършване на промени в изброените параметри коефициентът трябва да се преизчисли.
Ако активността на AST надвишава 300 U/l (точка извън зоната на линейност на калибрационната крива), анализираният серум трябва да се разреди 1:1 с физиологичен разтвор и измерването да се повтори, а резултатът от изчислението да се умножи по 2.
Клинична и диагностична значимост:AST присъства във високи концентрации в клетките на сърдечния мускул, черния дроб, бъбреците и еритроцитите. Увреждането на който и да е от тези органи и тъкани може да доведе до значително повишаване на серумната активност на AST.
Най-драматичните промени в каталитичната концентрация на AST се наблюдават при увреждане на сърдечния мускул. При остър инфаркт на миокарда повишаването на активността на AST обикновено започва 6-12 часа след началото на болката, достига максимум след 24-48 часа и след това постепенно намалява, връщайки се към нормалното след 4-5 дни от началото на атаката. Ако в рамките нав продължение на няколко дни не настъпва нормализиране на ензимната активност, това показва разширяване на инфарктната зона и е лош прогностичен знак.
Умереното повишаване на серумната активност на AST е характерно за хронични и инфилтративни чернодробни заболявания (цироза, обструктивна жълтеница, туморни метастази в черния дроб), както и увреждане на скелетната мускулатура (прогресивна мускулна дистрофия, мускулна релаксация, травма).
Коефициент на Де Ритис
Коефициентът на De Ritis е съотношението на активностите на AST/ALT. Обикновено е 0,6-0,8.
При вирусен хепатит стойностите му варират между 0,2-0,5. В разгара на заболяването коефициентът на De Ritis може да се повиши до 1,0 (активностите на AST и ALT са много високи) и по-високи - това е лош прогностичен знак, показващ началото на чернодробна дистрофия.
Стойността на коефициента на De Ritis при обструктивна жълтеница, цироза и хронично чернодробно заболяване, като правило,>gt; 1, докато има леко повишаване на активността на ензимите AST и ALT.
Лаборатория 13.
Определяне на концентрацията на урея в кръвния серум чрез ензимен метод
Принцип на метода:Уреята се разгражда от ензима уреаза до въглероден диоксид и амоняк. Амонякът реагира с хромоген (фенол-хипохлорит) в присъствието на ускорител на реакцията на натриев нитроболгарсид, за да образува синьо багрило:
Интензивността на цвета на разтвора при дължина на вълната 500-650 nm е право пропорционална на концентрацията на урея в него.
Линейност на метода:до 26.8 mmol/l.
Кръвен серум - 2,5-6,4 mmol / l (37С).
Оборудване и реактиви:
Спектрофотометър с терморегулируема кювета, дължина на вълната 500-650 nm, дължина на оптичния път 1 cm;реакционна температура 37°С;
Автоматични пипети 10 µl, 2,5 ml;
Реагент (фенол-хипохлорит, натриев нитроболгарсид, уреаза в буфер, рН 6,5);