Разпространението на пародонтопатогенната микрофлора при пациенти с хроничен периодонтит в средата и
Анализът на литературните данни показа липсата в някои етнически райони на България на проучвания, посветени на оценка на ролята в етиологията на разпространението на пародонталната инфекция и честотата на откриване на пародонтопатогенни бактериални видове от 1-ви порядък (A. actinomycetemcomitans, T. forsythia, P. gingivalis) и 2-ри порядък (P. intermedia, T. denticola, P. micros, F. nucle atum, E. corrodens и други). В същото време трудностите при лечението на възпалителни процеси в пародонталните тъкани са свързани с наличието на резистентни на лечение (торпидни) форми на пародонтит, което от своя страна може да се дължи на дългосрочната персистиране на пародонтопатогенни микробни видове (Царев В.Н. и др., 2006, 2010, 2011; Николаева Е.Н. и др., 2011; Tabanella G. e.a., 20 09).
АКТУАЛНОСТ НА ПРОБЛЕМА
Известно е, че в районите на Централна и Южна България, по-специално в Нижегородска област и Република Дагестан, диагностицирането на тези видове пародонтални инфекции досега не е извършвано поради липсата на прилагане на подходящи методи за тяхното откриване (PCR диагностика). В същото време разпространението на хроничния пародонтит сред възрастното население на Дагестан, особено в селските райони, е изключително високо (52,9%) в сравнение с равнината (37,5%) и предпланините (41,1%), т.е. варира в зависимост от екологичните зони (Абдурахманов, Г.Г., 2009, Плахтий Л.Я., 2002).
Въпросите за връзката на генетичния полиморфизъм, имунната реактивност на организма и активирането на някои видове пародонтопатогенна флора и съответно разработването на съвременни методи за диагностика и лечение на възпалителни пародонтални заболявания изискват по-нататъшно проучване (Царев В.Н., Николаева Е.Н.,2010 г.; Сафонова А. В. и др., 2011; Kilian M. e.a., 2006; Кинане Д.Ф. e.a., 2011).
Като се има предвид горното, разработването на налични критерии за ранна диагностика на възпалителни процеси в пародонта с помощта на PCR при коренното население на България, по-специално в Дагестан, ще осигури на практикуващия зъболекар научно обоснован подход към тактиката за лечение на пациенти с пародонтални заболявания, както и значително подобряване на качеството на лечението, като се вземат предвид регионалните характеристики.
Чувствителността на PCR диагностиката е много по-висока от тази на бактериологичния метод (честотата на идентифициране на вирулентни видове е по-висока) и такива клинично значими типове пародонтопатогени като T. forsythia и T. denticola не са били определени преди това в местната лабораторна практика по време на културни изследвания (Plakhtiy L. Ya., 2002; Nikolaeva E. N. et al., 2011).
МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ НА ИЗСЛЕДВАНЕ
Всички пациенти са дали информирано съгласие за клинико-лабораторни изследвания. Въз основа на разработените критерии за включване и изключване е формиран масив, който включва пациенти, прегледани на базата на дентални клиники в Махачкала и Нижни Новгород. За лечение са приети общо 170 пациенти с ЦП и продължителност на заболяването до 3 години (74 мъже и 96 жени на възраст 25-56 години). Включително 92 пациенти с CP от Нижни Новгород (38 мъже и 54 жени).
Групите за сравнение бяха формирани според етническата принадлежност, а подгрупите според тежестта на ЦП. Лек пародонтит (CPL) е открит при 78 пациенти, а умерен пародонтит (CPS) при 92 пациенти (Таблица № 1).
Таблица № 1. Разпределение на пациентите по групи и подгрупи.
Пародонтален статус
Общ брой пациенти
Контролната група се състоеше от 89 пациенти с непокътнат пародонт, включително 53 души от Махачкала и 36 от Нижни Новгород.
Всички пациенти са подложени на традиционно клинично и радиологично изследване на пациентите: изследване и определяне на хигиенното състояние на устната кухина - хигиенен индекс (OHIS), папиларно-маргинално-алвеоларен индекс (PMA); индекс на кървене от гингивалния сулкус (SBI), дълбочина на пародонталния джоб с помощта на сондираща техника, степен на подвижност на зъбите и периодонтален индекс на A. Russel. Всички пациенти са подложени на ортопантомограми преди лечението на ортопантомограф Phoenix (Финландия).
Лабораторните изследвания са проведени на базата на лабораторията по молекулярно-биологични изследвания на NIMSI и катедрата по микробиология, имунология и вирусология на Московския държавен медицински университет. За провеждане на молекулярно-биологично изследване са взети материали: при здрави хора - гингивална течност, при пациенти с пародонтит - ексудат от пародонтален джоб. Изследваният материал е взет преди приложението на химиотерапевтични средства в най-дълбоката част на пародонталния джоб.
При коренното население на Дагестан честотата на откриване на пародонтопатогенни бактерии от 1-ви порядък е по-висока, отколкото при славянското население на републиката и славянското население на Нижни Новгород Преди вземането на проби, супрагингивалните отлагания бяха отстранени със стериленкюрети. Мястото за вземане на проби се изсушава със стерилна памучна топка. С помощта на стерилни пинсети стандартен размер стерилен хартиен ендодонтски щифт (№ 30) се вкарва в най-дълбоката част на пародонталния джоб, така че да се избегне контакт с лигавицата, повърхността на емайла или зъбната корона, за 10 секунди, след което се поставя в стерилна пластмасова епруветка тип Eppendorf, съдържаща 0,5 ml физиологичен разтвор. Съдържанието на епруветката се смесва, сондата се отстранява (Царев В.Н. и др., 2006).
Молекулярно-биологичните изследвания включват определяне на маркерна ДНК на пародонтопатогенни видове от 1-ви порядък (Aggregatibacter actinomycetemcommitans (Actinobacillus) actinomycetemcomitans, Tannerella (Bacteroides) forsythia, Porphyromonas gingivalis) и 2-ри порядък (Prevotella intermedia, Treponema denticola), използвайки мултиплексна полимеразна верижна реакция ( PCR). За това използвахме домашния комплект реактиви "Мултидент-5" (SPF "Genlab", България).
Идентифицирането на други пародонтопатогенни видове от 2-ри ред (Fusobacterium nucleatum/periodonticum, Parvimonas micra, Eikenella corrodens) се извършва по традиционния бактериологичен метод, като се използва техниката на анаеробно култивиране в анаеробен балон върху 5% хеминов кръвен агар. Статистическият анализ на данните включваше методи на вариационна статистика с дефинирането на критерия на Стюдънт за множество сравнения и извън него, бяха използвани програми на Excel (MS Office), като се отчита броят на пробите, беше определена вероятността за разлики p. За непараметрични данни беше използван софтуерният пакет Biostat, включително X2 тест. p
Липсват маркери за пародонтопатогенни бактерии при 6 души с лека ХГП - 11,5%. Общо 92 прегледани пациенти са диагностицирани с лека ЦП при 52 пациенти, което представлява 56,5%. Честотата на поява на маркерна ДНК на един тип пародонтопатоген е отбелязана в 19,2% от случаите (при 10 пациенти с лек CP); честотата на поява на маркерна ДНК на два вида пародонтални патогени е 38,5% (20 пациенти с лек CP). В същото време доминират по честота на срещане пародонтопатогенните видове от 1-ви порядък - T. forsythia и P. gingivalis.
Честотата на откриване на асоциации от няколко типа при пациенти с лек CP е както следва: асоциации на три вида пародонтопатогени - при 6 (11,5%), асоциации на четири вида пародонтопатогени - при 10 души (19,2%). В нито един случай не са открити маркери на пет вида пародонтопатогенни грам-отрицателни анаеробни бактерии.
Диагнозата CP с умерена тежест в острия стадий е поставена при 40 пациенти от 92 пациенти, което възлиза на 43,5%.
За да се изясни етиологията на CP, за да се обоснове назначаването както на локално, така и на системно антибактериално лечение, е показана мултиплексна полимеразна верижна реакция. Откриването на маркерна ДНК на един тип пародонтопатогени е отбелязано при 4 пациенти с CP с умерена тежест, т.е. в 10% от случаите. Не са открити маркери на два вида пародонтопатогенни грам-отрицателни анаеробни бактерии. Честотата на откриване на асоциации от няколко вида при пациенти с CP с умерена тежест: асоциации на три вида пародонтопатогени са открити при 14 души (35%); асоциации на четири вида пародонтопатогени също при 14 пациенти (35%). Честотаидентифицирането на различни видове е приблизително еднакво с известно преобладаване на P. intermedia. Не са идентифицирани маркери на пет вида пародонтопатогенни грам-отрицателни анаеробни бактерии.
При 8 пациенти с обективни клинични признаци на умерен CP в острия стадий, т.е. в 20% от случаите, не е открит нито един ДНК маркер на изследваните видове пародонтопатогени.
Получените от нас данни ни позволяват да заключим, че при 14 пациенти (15,2%) от 92 (100%), изследвани с CP в Нижни Новгород, използвайки PCR диагностичния метод, не е открит нито един маркер за пародонтопатогенна микрофлора сред представените в диагностичния комплект MultiDent-5.
Според литературните данни, последното може да се обясни с амфихиралността на микробната етиология на пародонтита, по-специално ролята на други периодонтопатогенни видове от 2-ри ред, откриването на маркерна ДНК на които не е предвидено от диагностичния комплект MultiDent-5, например Fusobacterium nucleatum / periodonticum, Eikenella corrodens, Parvimonas (Peptostreptococcus) micro s и някои други.
В допълнение, той може да бъде свързан и с други етиологични фактори на това заболяване, като гъбички Candida, които причиняват асоцииран с Candida пародонтит. Също така е невъзможно да се изключи пародонтит, свързан с инфекция с херпес вирус (Царев V.N. и др., 2006, 2010, 2011).
- Относителната честота на откриване в пародонталните джобове в славянската популация на Махачкала и Нижни Новгород на ДНК на пародонтопатогенни видове от 1-ви ред A. actinomycetemcomitans, T. forsythia, P. gingivalis, както и два вида от 2-ри ред - T. denticola и F. nucleatum - е 1,4-2 пъти по-ниска, отколкото в местното население на Република Da гестан (Махачкала). В 15% от случаите не са открити ДНК маркериизследвани пародонтопатогени.
- При лека ХП 50% от пациентите имат един или два пародонтопатогенни вида, предимно от 1-ви порядък: T. forsythia и P. gingivalis. При ХП със средна тежест - само в 10% от случаите, като преобладава полиинфекцията с участието на пародонтопатогенни видове от 1-ви и 2-ри ред.
- За да се изясни етиологията на CP, за да се обоснове назначаването както на локално, така и на системно антибактериално лечение, е показана мултиплексна полимеразна верижна реакция, която позволява да се идентифицират генетични маркери на основните видове пародонтопатогенни бактерии от 1-ви и 2-ри ред.