Характеристики на генеза на антителата при експериментален хипотиреоидизъм
Характеристики на антителогенезата при
Държавен университет "Институт по микробиология и имунология на името на I.I. Мечников, AMS на Украйна" (Харков, Украйна)
Ключови думи:експериментален хипотиреоидизъм, 1-метил-2-меркаптоимидазол, антителогенеза, ADS ваксина, плъхове.
Особености на антителогенезата при експериментален хипотиреоидизъм
В експеримент върху 3-месечни мъжки плъхове Wistar са изследвани особеностите на имунния отговор към ваксинация с ADP токсоид при хипотиреоидно състояние на организма, причинено от продължително приложение на 1-метил-2-меркаптоимидазол през целия експеримент. При хипотиреоидни животни активността на синтеза на дифтерийни и тетанични антитоксини в продуктивната фаза на антителогенезата (на 21-ия и 28-ия ден след ваксинацията) е значително намалена в сравнение с еутироидните плъхове. Установена е положителна корелация на серумните концентрации на анти-дифтерийни и антитетанични антитела в продуктивната фаза на образуване на антитела със серумните нива на Т3 и Т4 преди ваксинацията, както и отрицателна корелация със серумните нива на кортикостерон преди ваксинацията.
Ключови думи:експериментален хипотиреоидизъм, 1-метил-2-меркаптоимидазол, генезис на антитела, ADP ваксина, плъхове.
Характеристики на генеза на антитела при експериментален хипотиреоидизъм
В експеримента върху 3-месечни мъжки плъхове Wistar са изследвани характеристиките на отговора на антителата при имунизация с ADT-анатоксин на фона на хипотиреоидно състояние на организма, предизвикано от продължително лечение с 1-метил-2-меркаптоимидазол. Активността на синтеза на дифтерийни и тетанични антитоксини при хипотироидни плъхове в продуктивната фаза на образуване на антитела (на 21 и 28 дни след ваксинацията) е значително намалена в сравнение с еутиреоидни плъхове. Тясна положителна корелация на дифтерия иОткрити са серумни нива на антитела срещу тетанус в продуктивна фаза на генезис на антитела с концентрации на суроватка в кръвта Т3, Т4 преди ваксинация и отрицателна корелация - с концентрация на суроватка на кортикостерон преди ваксинация.
Ключови думи:експериментален хипотиреоидизъм, 1-метил-2-меркаптоимидазол, генезис на антитела, ADT-ваксина, плъхове.Въведение
Нервната, ендокринната и имунната система са функционално и анатомично взаимосвързани (Wrona, 2006; Besedovsky and del Rey, 2007). Оста хипоталамус-хипофиза-щитовидна жлеза заема специално място в тази система (Wang and Klein, 2001). Идеите за взаимодействието между хипофизно-щитовидните хормони и имунната система се основават на съществуването на рецептори за тиреоид-стимулиращи и тироидни хормони върху лимфоцитите, както и данни за чести имунни нарушения, наблюдавани с физиологични и патологични колебания в нивата на тиреоидните хормони (Chandel et al., 2000). Описано е участието на тиреоидните хормони в първичната и вторичната лимфопоеза (Dorshkind and Horseman, 2000). Доказано е, че хипотиреоидизмът при хора или експериментално индуцираният хипотиреоидизъм (излагане на пропилтиоурацил и тиреоидектомия при гризачи) намалява активността на тимуса, ефект, който напълно изчезва при лечение с тиреоиден хормон (Fabris et al., 1995). Освен това е установено, че експерименталният хипотиреоидизъм води до инволюция на далака и лимфните възли, както и до потискане на хуморалния и клетъчния имунен отговор (Klecha et al., 2006; Ohashi and Itoh, 1994). Възстановяването на функцията на щитовидната жлеза след блокада, причинена от тиоурея, също възстановява хуморалния отговор към еритроцитите на овен в експеримента (Schoenfeld et al., 1995). Многопосочни, зависими от дозата ефекти на екзогенния тироксин върху образуванетохуморален имунен отговор и фагоцитна активност (Krasnykh et al., 2003; Volyansky ta sh., 2008). При хора е описано потискане на клетъчния имунитет при тежък хипотиреоидизъм, с подобрение на функцията на лимфоцитите по време на постепенно връщане към еутироидно състояние (Vinayagamoorthi et al., 2005).
Важна роля в осъществяването на имуноневроендокринното взаимодействие принадлежи на хипоталамо-хипофизо-надбъбречната система (HPAS), чиито хормони, включително глюкокортикоиди (GC), участват както в реакцията на организма към стрес, така и в регулирането на много имунни процеси (McEwen et al., 1997; Franchimont, 2004; Oskina et al., 2008). Установено е, че физиологичната роля на НА в имуногенезата е да предотвратява прекомерната активност на имунните отговори, като същевременно поддържа тяхната специфичност (Besedovsky and del Rey, 2007). Като цяло ефектът на НА върху имунологичните процеси е по-сложен от генерализираното потискане на активността на имунната система и зависи от вида на имунната активност и субпопулацията на имунните клетки, участващи в имунния отговор (Franchimont, 2004). Въпреки това е ясно, че ендогенните НА са ключов регулатор на функцията на имунната система.
Като се имат предвид данните за регулаторната роля на тиреоидните хормони в имуногенезата, може да се приеме, че нарушението на функционалното състояние на щитовидната жлеза е една от причините за намален хуморален имунен отговор по време на антигенна стимулация и по-специално недостатъчната ефективност на ваксинацията на населението. Увеличаването на честотата на дисфункцията на щитовидната жлеза (Hollowell et al., 2002; Lapatov, 2003) показва необходимостта от разработване на прогностични критерии за ефективността на ваксинацията, като се вземе предвид тиреоидният статус на организма.
Целта на изследването е да се проучат особеностите на генезата на антителата при хипотиреоидно състояние.организъм, причинени от въвеждането на 1-метил-2-меркаптоимидазол (MMI) в експеримента, за подобряване на критериите за прогнозиране на ефективността на ваксинацията.
Обекти и методи на изследване
Експериментът е проведен върху 3-месечни мъжки плъхове Wistar в съответствие с препоръките на Европейската етична конвенция за защита на гръбначните животни, използвани за експериментални и научни цели (Международни препоръки. 1993).
За да се симулира хипотиреоидното състояние на тялото, MMI беше избран като антитироидно лекарство, което обикновено се използва при лечението на хипертиреоидизъм, а също и като фактор, който уврежда имунната функция в по-малка степен от всяка от опциите за тиреоидектомия.
Плъхове от група I (контролна група, 7 индивида) се инжектират с физиологичен разтвор интраперитонеално веднъж дневно в обем от 0,25 ml на 100 g телесно тегло. При плъхове от групи II и III (15 индивида във всяка) хипотиреоидното състояние се предизвиква чрез продължително (по време на целия експеримент) интраперитонеално приложение веднъж дневно на MMI в доза от 1,0 mg на 100 g телесно тегло. Животните от група II бяха контролната група на хипотироидното състояние на тялото през целия експеримент (група за сравнение). Плъхове от група III на 10-ия ден след първоначалното инжектиране на MMI и плъхове от група IV, които са в еутироидно състояние (15 индивида), се имунизират с ADS-токсоид. Ваксината се инжектира подкожно еднократно в минималната ефективна доза - 15 LF дифтериен и 5 OZ тетаничен токсоид в 0,25 ml от препарата (Volyansky tash., 2006). Животните се изваждат от експеримента чрез обезглавяване под лека етерна анестезия на 13-ия ден след прилагане на физиологичен разтвор (група I) и на 3, 7, 14, 21 и 28 дни след имунизацията (групи II-IV). Полученият кръвен серум се замразява и съхранява при-20°С преди измерванията не повече от 3 месеца.
Антителата (AT) към дифтерийни и тетанични токсоиди на ADS-ваксини се определят в кръвния серум чрез реакцията на пасивна хемаглутинация, като се използва стандартната търговска "Диагностикум на еритроцитна дифтерийна антигенна течност" (с активност 1: 3200) и "Диагностикум на еритроцитна тетанична антигенна течност" (с активност 1: 1280 , 1:2 800) произведени от АООТ "Биомед" им. I.I.Мечникова (Украйна). Концентрацията на тироксин (Т4) и трийодтиронин (Т3) се определя чрез радиоимуноанализ, като се използват стандартни комплекти от реактиви "Total T4 RIA", "Total T3 RIA", произведени от Immunotech (Чехия). Концентрацията на кортикостерон се определя чрез ензимен имуноанализ, като се използват стандартни комплекти от реагенти за имуноанализ на кортикостерон, произведени от RDS (Великобритания). Статистическата обработка на резултатите от изследването е извършена на компютър с помощта на пакета приложения Statistika V.6.
Резултати и дискусия
Под въздействието на MMI се наблюдава намаляване на тиреоидния статус на тялото, както се вижда от намаляване на серумната концентрация на Т4 с 69,3% (P