ТЪКАННИ МАСТКЛЕТКИ И КРЪВНИ БАЗОФИЛИ ПРИ АЛЕРГИЯ
Тъканните мастни клетки и базофилните левкоцити играят важна роля в алергичните реакции от незабавен тип, като участват в освобождаването на хистамин, хепарин и, вероятно, серотонин (Rorsm.an, 1962).
Сравнителен брой базофилни левкоцити и тъканни мастоцити при хора и различни лабораторни животни (според Micliels, 1963)
| Базофили и | Тъканни мастоцити | |
| Възрастни | 0,35—0,45 | Много |
| деца | 3-6 |
4-8 4-11
В действителност, за повечето животински видове мастоцитите са мястото на съхранение и източник на освобождаване на хистамин по време на анафилаксия. Мастоцитите на плъх, според Ungar (1956), имат диаметър 10-15 µm и съдържат 250-300 гранули. Съдържанието на хистамин в 10-6 клетки е 20-15 микрограма. Съответно това количество съдържа 1 μg серотонин и 70-90 μg хепарин. Само при някои животни биологично активни вещества, включително хистамин, се освобождават и от други клетки - от тромбоцити при зайци (Humphrey, Jaqnes, 1954, 1955), от кръвни базофили при хора (Graham et al., 1955).
При различните животни процесът на увреждане на мастоцитите и освобождаването на хистамин протичат по различен начин. При морските свинчета гранулите се разрушават, сякаш изчезват от мастоцитите.Този процес се нарича дегранулация. При плъховете гранулите излизат от клетката и се намират извън клетката, близо до нея. Този процес се нарича разрушаване на клетките. И накрая, под въздействието на лекарството 48/80 при морски свинчета се наблюдава "топене" (сливане) на метахроматичен материал от гранули на мастоцитите, придружено от освобождаване на хистамин *
L. M. Ishimova и L. I. Zelichenko (1967) изследват морфологията на мастоцитите в мезентериума на плъхове в експерименти с пасивна сенсибилизация in vitro със серум на зайци, сенсибилизирани с тимотейков прашец. В тези експерименти, след инкубиране на мастоцитите с антитела срещу цветен прашец от тимотейка и по-нататъшния им контакт със специфичен алерген, се наблюдава промяна на мастоцитите, изразяваща се в тяхното подуване, увеличаване на размера, вакуолизация, екструзия на гранули със загуба на метахромазия. Процентът на дегранулираните клетки варира от 43 до 90. Въпреки това, степента на дегранулация и тежестта на морфологичните промени не зависят от титъра на циркулиращите антитела. Това позволи да се предположи, че имунният серум на заека съдържа, наред с утаяващите антитела, специален тип цитофилни антитела, които причиняват промяна на мастоцитите. Човек може да си помисли, че по своята същност те са близки до антителата на Mota за "сенсибилизиране на мастоцитите", които причиняват анафилаксия на мастоцитите при активно сенсибилизирани плъхове.
Изследванията, проведени през последните години, позволиха да се преразгледа механизмът за задействане на алергичната реакция на мастоцитите (I. S. Gushchin, 1973-1976). Основният резултат от тези изследвания е установяването, че алергичната реакция на мастоцитите не се предизвиква от увреждането им, а от активирането на тяхната функция. Преди всичко трябва да припомним тези факти, които свидетелстват залипсата на увреждане на изолирани мастоцити след възпроизвеждане на анафилактична реакция, оценена чрез освобождаване на хистамин.
Така се оказа, че мембранният потенциал, записан с помощта на вътреклетъчни стъклени микроелектроди от изолирани мастоцити, не се променя, след като те претърпят анафилактична реакция (IS Gushchin et al., 1974). От друга страна, механично увреждане или цитотоксичен ефект (от Triton X-100) върху мастоцитите е придружено от изчезване на мембранния потенциал. По време на анафилактичната реакция на мастоцитите екстрагранулираните цитоплазмени включвания не се освобождават от тях. Това се доказва от липсата на освобождаване на лактат дехидрогеназа и АТФ от клетките и 42K, предварително включени в клетките (Johnsen и Moran, 1969; Kaliner и Austen, 1974).
Цитотоксичните агенти (Triton X-100) карат клетките да загубят всички тези вътреклетъчни съставки.
51C, предварително включен в мастоцитите, също не се освобождава от тях под действието на специфичен антиген, което се извършва по време на цитотоксично действие (IS Gushchin et al., 19746).
В мастоцитите, които са претърпели анафилактична реакция, енергийно зависимите механизми на трансмембранен транспорт на биогенни амини в клетките не са нарушени (I. S. Gushchin, B. Uvnas, 1975), което е показано чрез радиологичен метод за изследване на кинетиката на навлизането на 5-хидрокситриптамин и допамин в изолирани мастоцити на плъхове.
Систематично изследване на ултраструктурни промени в изолирани мастоцити по време на анафилактична реакция също показа
липсата на картина на клетъчно увреждане (I. S. Gushchin, 1976; Anderson, 197.)). '') i и промените се състоят в образуването на сливане на негранулиранимембрани един с друг и с обща цитоплазмена мембрана, поради което има пътища, по които извънклетъчните катиони проникват в пространствата около гранулите. Когато това се случи, подуване и намаляване на електронно-микроскопската плътност на гранулите, увеличаване на пространствата между гранулите и перигрануларната мембрана около тях. Изключването на биологично активни вещества, които са в гранули в слаба йонна връзка с хепарин-протеиновия комплекс, се извършва чрез изместването им с извънклетъчни катиони (предимно натриеви йони) съгласно принципа на йонообменния процес (Uvnas, 1971, 1974). Клетъчното ядро и други извънгранулирани цитоплазмени включвания остават в клетките, които са претърпели анафилактична реакция, без видими промени.
По този начин тези промени са много подобни на секреторните реакции, по-специално на екзоцитозата, чийто модел е описан подробно в секреторните клетки на панкреаса и други жлезисти клетки. Сходството на анафилактичното освобождаване на биологично активни вещества от мастоцитите с екзоцитоза се потвърждава не само от данните от общия електронен микроскопски анализ, но и от специални изследвания, проведени с помощта на извънклетъчни маркери (лантан и хемоглобин). В мастоцитите, върху които е възпроизведена анафилактична реакция, екстрацелуларните маркери са разпределени по външната страна на цитоплазмената мембрана и пергрануларните мембрани, заобикалящи електронномикроскопски променени гранули, но не проникват в цитоплазмата на клетката (Anderson, 1975). Тези данни потвърждават заключението, че свързаните помежду си и с общата цитоплазмена мембрана перигрануларни мембрани отделят цитоплазмата на клетката от извънклетъчната среда и поддържат целостта на структурната организация на клетката.получи анафилактична реакция.
Сходството на анафилактичното освобождаване на биологично активни вещества от мастоцитите със секреторните процеси се посочва и от участието на Caioi в него. Както при други секреторни реакции, Ca йони са необходими за освобождаването на хистамин и други медиатори на анафилаксия от мастоцитите (Mongar and Schild, 1962). Освен това, Mn йони, които специфично блокират каналите на калциевата мембрана, през които Ca ioi навлизат в клетката, инхибират анафилактичното освобождаване на хистамин от мастоцитите (I. S. Gushchin et al., : 1.974a). Увеличаването на пропускливостта на клетъчната мембрана за Ca йони очевидно е спусък в механизма на освобождаване на биологично активни вещества от клетките, но не може да се изключи мобилизирането на Ca йони в клетките в свързано състояние (I. S. Gushchin, 1976).
Изследването на биохимичния механизъм на анафилактична екскреция на медиатори наскоро беше допълнено от изследване на ролята на цикличния 3,5-аденозин моиофосфат (cAMP) в този процес. Активатори на адеил циклаза и инхибитори на фосфодиестераза, които причиняват натрупване на сАМР в клетките, и екзогенен сАМР дибутирил инхибират анафилактичното освобождаване на хистамин и други медиатори от изолирана човешка и животинска тъкан, от тъканта на назални полипи и белодробни клетки (Bourne et "L. 1974; Ansten, 1974).
Тъй като тези данни са получени върху хетерогенна клетъчна популация, трудно е да се каже дали ефектът от тези вещества се реализира върху
По този начин тези данни са пряко потвърждение за участието на сАМР в анафилактичното освобождаване на медиатори на ниво целеви клетки. Освен това те съвпадат с данните, получени при тестване на хистамин-освобождаващия ефект на антисерума.срещу плъши гама глобулин върху изолирани мастни клетки от плъх (Kaliner and Austen, 1974). Този модел на освобождаване на хистамин може да се разглежда, с известни резерви, като модел на обратна мастоцитна анафилаксия. Схематично освобождаването на хистамин от мастоцитите по време на реакция антиген-антитяло може да бъде представено по следния начин:
 |
Освобождаването на хистамин от чувствителни към IgE мастоцити под въздействието на алергена се блокира от антихистамини поради увеличаването на съдържанието на сАМР в клетките, причинено от него.
Антихистаминовите лекарства, които блокират Н2 рецепторите на клетката (хлорпромазин, дифенхидрамип и др.), в доза от £0,1 mMol, сами предизвикват освобождаване на хистамин от клетката, но блокират освобождаването на хистамин под въздействието на алерген.
В същото време, Hi антихистамините причиняват спад в съдържанието на cAMP в клетките, което показва възможен механизъм на тяхното действие. Ni-adtihistamipy (буримамид, метиамид) блокират освобождаването на хистамин от клетките, но самите те не предизвикват или потискат освобождаването на хистамин под въздействието на алерген.
Подобно на тъканните мастоцити, кръвните базофили също реагират с алергии.
През 1962 г. Shelley предлага специален диагностичен тест, базиран на дегранулацията на базофилни левкоцити под действието на реакция алерген-антитяло.
Реакцията на деграпулация на базофилите може да се осъществи по два начина:
1) директна реакция, възпроизводима върху спонтанно сенсибилизирани левкоцити на пациент с алергични заболявания (левкоцити на пациента + алерген); 2) индиректна реакция, възпроизведена върху левкоцити на здрав човек (или заек) с кръвен серум на пациент с алергично заболяване (левкоцити + тестов серум + алерген).
A. A. Polper в нашата лабораторияизползва реакцията на непряка деграпулация на базофилите, за да изследва човешките алергични реакции към полена от тимотейка (Phleum pratense) и eyash team (Daetylis glomerate).
За разлика от алергичните антитела, определени от реакцията на базофилна деграпулация, титрите на хемаглутиращите антитела в процеса на специфична десенсибилизираща терапия се променят доста ясно нагоре (AD Ado, A. A. Polner et al., 1963). Хемаглутиниращите антитела, от друга страна, е известно, че са тясно свързани с блокиращите антитела, които играят "защитна" роля при алергията към полени.
Подобно сравнение ни позволява да мислим за различна роля от блокиращите - "защитни" - антитела, ролята на антителата, определени от реакцията на дегранулация, вероятно отразяващи нивото на реагини, които играят важна роля в механизма на развитие на човешки алергични реакции.
Т. И. Серова (1973) подробно изследва реакцията на базофилите в кръвта към специфичен алерген във II AL Академия на медицинските науки на СССР. Тя установи, че количествените промени в базофилите в кръвта, които играят важна роля при алергични реакции от незабавен тип, по-специално при сенна хрема, могат да служат като индикатор за сенсибилизация на организма. При изчисляване на абсолютния брой базофили в 1 mm3 кръв в камерата за броене беше установено, че броят на базофилите при пациенти с полиоза е повишен (49,32 ± 4,28) в сравнение с този при практически здрави индивиди (36,02 ± 3,00; p-реакцията може да се използва като спомагателен метод за специфична диагноза на полиноза. При условие, че оптималните концентрации на алергена и изследвания кръвен серум, тази реакция може да служи като in vitro метод за изследване на алергии от непосредствен тип на човек към цветен прашец (фиг. 52).
Изследване на непряка базофилна реакция при сенна хремамикрофилмът направи възможно идентифицирането на редица от неговите последователни етапи: след
Ориз. 52. Реакция на допълнително присаждане на заешки базофили, io Shelley, a — контрола: заешки базофили +
алерген, към който пациентът е чувствителен; b - експеримент: заешки базофили + тестов серум
th + специфичен алерген, към който пациентът е чувствителен.
след латентния период се наблюдава повишена амебоидна активност на базофилите и засилена "гранулокинеза", които се заменят със състояние на относителен покой на клетката. Морфологично тези клетки са неразличими от контролните клетки, които не са участвали в реакцията. Не се наблюдава пълно разрушаване на клетките и истинска дегранулация. Тези факти предполагат, че кръвните базофили, подобно на тъканните базофили (мастоцити), под въздействието на специфичен алерген преминават през етап на възбуждане, което се изразява в активирането на техните амебоидни движения.
Специфичната реакция на кръвните базофили при сенна хрема се определя от участието на реагини в нея. Следните факти подкрепят това предположение:
а) реакцията на базофилите в кръвта не изисква участието на комплемент, а антителата, които причиняват специфична базофилна реакция, са термолабилни;
б) човешки алергични антитела при сенна хрема, открити от ба
зофилна реакция, имат статистически значима положителна корелация с нивото на реагини.