Получаване на фенол
Получаване на фенол за изолиране на ДНК, РНК.
Скоростта на окисление на фенола се увеличава с повишаване на pH, температура и концентрация. За да се сведе до минимум окислението, се препоръчва първо да се насити фенолът с вода и след това да се уравновеси с буфер, ако е необходимо.
Окисленият фенол става жълт или червен, когато се насити с вода или буфер.
Извадете бутилката с кристален фенол от хладилника, загрейте до RT, разхлабете капачката
Сложете в гореща вода, загрейте до +65C, докато се разтопи.Забележка:ако един буркан с фенол е 100 гр., тогава е по-добре да го наситите наведнъж с вода направо в буркана (там обикновено има свободно място). Ако бурканът е 1 кг, налейте толкова, колкото е необходимо, а останалото съхранявайте при + 3 ° С под азот.
Напълнете 100 грама. резервоар с фенол с дейонизирана стерилна вода до гърлото (по принцип е достатъчна 1/5 от обема фенол, защото 100 g фенол се насищат с 12,36 ml вода).
Завийте добре капака и разклатете добре, така че водната и органичната фаза да образуват добра емулсия.
Задайте на + 3C, така че фазите да се разделят (в рамките на 8-16 часа).
Изсмучете горния воден слой.
Разделете фенола на малки обеми, достатъчни за 1-2 употреби.
Добавете стерилна дейонизирана вода, за да покриете фенолния слой.
Да се съхранява при +3С, защитено от светлина. По-добре е да използвате кехлибарени стъклени бутилки, увити във фолио. В тази форма фенолът ще бъде стабилен няколко месеца (минимум 3). Не се препоръчва замразяване на фенол.
Такъв фенол има рН около 4,7-5,5. След това трябва да се балансира с Tris-HCl буфер. При високо рН фенолът се окислява бързо, така че се препоръчва рН на буфера за уравновесяване на фенол да не надвишава 8,0. Ако наистина искате, можете да добавите8-хидроксихинолин до 0,1% (спрямо фенолната фаза), той ще действа като антиоксидант.
Насищане на фенол с буфер cTris-HCl
Изсипете необходимото количество наситен с вода фенол в чист стерилен стъклен или полипропиленов контейнер и добавете същия обем от 0,5 МTris-HCl(pH 8,0).
Разбъркайте добре и дръжте на стайна температура (20-25C), докато фазите се разделят (можете да го развиете, за да ускорите процеса).
Изсмучете горната водна фаза.
Добавете същия обем 0.1-M Tris-HCl (рН 8.0). Повторетестъпка 2.
Проверете pH на водната фаза с индикаторна хартия. Повторетестъпки 3 и 4докато pH стане 7,0 - 8,0 (в идеалния случай 7,4).
Съхранява се при +3С в бутилки на защитено от светлина място около 1 месец.